卡梅德生物技术快报｜骆驼纳米抗体：从原核表达、高通量测序到分子对接全流程实现

1. 问题背景技术痛点靶向结合分子开发中传统抗体制备存在分子量大扩散与穿透效率有限文库构建与淘选周期长难以规模化原核表达与纯化体系不稳定批次差异大筛选缺乏高通量手段效率偏低。骆驼纳米抗体VHH为单域小分子适合标准化、高通量开发。2. 问题分析靶标胞外区域需经生物信息学验证排除跨膜与信号肽干扰原核表达需优化诱导条件提升可溶性或便于包涵体复性免疫方案直接决定骆驼纳米抗体多样性与效价高通量测序 质谱可替代噬菌体文库大幅提速分子对接用于亲和力预测减少实验验证成本。3. 解决方案标准化实验流程3.1 生物信息学分析流程序列翻译→SignalP 6.0 测信号肽→TMHMM 测跨膜→ProtScale 测疏水性→PSIPRED 测二级结构→SWISS‑MODEL 建模→GMQE/QMEAN 评估质量。3.2 基因克隆与表达可复现引物F1-CCGGAATTCACTGTCTGTGCCGGTGGCTGR1-CCCAAGCTTtcaCACTCGGGCACAGGGCTT体系20 μLcDNA 1 μL引物各 1 μL2×MasterMix 10 μL条件94℃ 5min35 cycles94℃ 30s58℃ 30s72℃ 90s72℃ 10min表达BL21 (DE3)OD6000.60.5% IPTG18℃诱导 12h3.3 纯化与免疫Ni‑NTA 柱20 mM 咪唑洗杂300 mM 咪唑洗脱免疫1 mg / 只4 次每 28 天一次3.4 骆驼纳米抗体筛选洗脱0.1 M glycine‑HCl pH3.0中和 1 M Tris‑HCl pH8.0高通量测序Illumina MiSeqTrimmomatic 质控3.5 分子对接Haddock3 次独立运算每次 100 构象选取 RMSD2Å、Haddock score 优模型4. 实验数据可直接引用目的条带375 bp蛋白~32 kDa效价1:640000骆驼纳米抗体~15 kDaVHH 独特序列10430条高丰度分子5 个结合能−13.3 ~ −15.5 kcal/mol。5. 技术结论本流程实现骆驼纳米抗体从抗原制备到筛选验证的全链路标准化可直接复用于其他靶标。骆驼纳米抗体展现高特异性、高亲和力与高稳定性为靶向蛋白工具开发提供高效方案。参考文献黄贞魁李村院李晓悦等. HER2 特异性的驼源纳米抗体制备与筛选 [J]. 内蒙古农业大学学报 (自然科学版), 2025.